باکتری های هتروتروف در آب

باکتری های هتروتروف در آب شامل تعداد کل میکروب­ های موجود در واحد حجم نمونه است که در نمونه های آب به دلایل زیر، بررسی می­ شود.

1. مقادیر زیاد باکتری، حتی در صورت غیر بیماری ­زا بودن، نشان دهنده ­ی مدار قابل ملاحظه ­ای مواد آلی قابل تجزیه است. که با رشد در دیواره ­ی لوله ­های انتقال آب، منجر به کاهش توانایی انتقال آن­ها می ­شوند. قسمت­ هایی از باکتری ­ها نیز ممکن است وارد آب لوله ­کشی مصرف کننده شوند.
2. در مواردی که برای فرایندهای صنعتی از اب آشامیدنی استفاده می ­شود (در صنایع غذایی) تعداد کم باکتری، به ویژه باکتری غیر بیماری­زا مطلوب می­ باشد.
3. چنانچه این آزمایش از لحاظ بهداشت عمومی به طور روتین انجام گیرد، معیار معتبری برای ارزیابی فرآیند تصفیه و سیستم انتقال می ­باشد. اگر فرآیند تصفیه، به درستی انجام نشود، به ورود باکتری ­های غیر بیماری­زای خاک به آب منجر می ­شود که با آزمایش های معمولی روتین به تنهایی قابل تشخیص نیست.

در این آزمایش، روش استاندارد کشت در محیط (PCA =Plate Count Agar) در شرایط هوازی، به مدت 3 روز در دمای ċ 35 به کار می­ رود. روش مذکور، همه­ ی میکروب­ هایی را که در این شرایط نمی­تواند رشد کنند (مانند بی هوازی­های اجباری) حذف می ­نماید. درضمن، باید در نظر داشت که برخی از سلول­ های میکروبی، به صورت تجمعی به یکدیگر می­ چسبند و بنابر این، هر کلنی الزاما از یک سلول منشأ نمی­گیرد.

این روش، تنها شاخصی از کل باکتری­های زنده در حجم معینی از آب می­باشد که به طور یقین، گویای تعداد واقعی نیست.

آنالیز باکتری های هتروتروف در آب

باکتری های هتروتروف در آب با یک پی­پت استریل، ml1 از آب نمونه (آشامیدنی) را وارد یک پی­پت استریل کنید. حال cc15 محیط کشت PAC که دمای آن ċ45 است به ان اضافه کنید و با حرکت چرخشی کاملا یکنواخت مخلوط کنید. منتظر باشید تا محیط ببندد و سپس در دمای ċ 35 قرار دهید. در صورت نمونه ­برداری از آب سایر منابع، باید رفت­ هایی از آب نمونه تهیه شود. بعد از 48 ساعت پلیت ­هایی را که دارای 30-300 کلنی هستند شمارش کنید (برای هر رقت پویلیت تهیه کنید). تعداد کلنی­ها را در عکس ضریب رقت ضرب کنید. به عنوان مثال اگر در پلیتی با رقت 20*10^-4 خواهد بود.

این روشف به روش پوریلیت معروف است و با آن، تمام باکتری­ های موجود در یک نمونه (آب، فاضلاب و …) را نمی ­توان شمارش کرد، زیرا روش با محیط کشتی که بتواند کلیه نیازهای فیزیولوژیک باکتری­ های گوناگون را فراهم آورد وجود ندارد.

برای شمارش باکتری­ ها در یک نمونه، روش دیگری وجود دارد به نام روش پخش کردن در سطح () که با روش پوریلیت تفاوت کمی دارد. در این روش، به جای مخلوط کردن ml1 نمونه با رقت­های آن با محیط کشت، ml 0.1 نمونه با رقت­ های آن در سطح پلیت و با استفاده از میله شیشه­ ای خمیده پخش می­شود. پس از طی زمان انکویاسیون (به طور معمول 48 ساعت) کلنی­ هایی را که در سطح پلیت ظاهر شده­ اند، شمارش نمود، و جواب در عکس ضریب رقت و در عدد 10 ضرب می ­شود. به عنوان مثال، اگر از رقت 8*10^-5 کلنی به دست آمده باشد تعداد باکتری­های موجود در ml1 نمونه CFU 8*10*10⁵ خواهد بود.