تشخیص باکتری اشرشیاکلی در آب

باکتری اشرشیاکلی یکی از اعضای گروه کلیفرم مدفوعی است. تشخیص باکتری اشرشیاکلی در آب نشانگر آلودگی مدفوعی در آب می باشد.تست های آنزیمی که توسعه داده شده اند منظور شناسایی این ارگانیسم طراحی و اجرا شده اند.در این روش ، اشرشیاکلی (E.coli) به عنوان باکتری گروه کلی فرم تعریف شده اند که  دارای آنزیم β-گلوکورونیداز هستند. که باکتری ها اشرشیا کلی قادر به تجزیه بستر فلوروژنیک  4Methylumbelliferyl-β–D-glucuronide – MUG  بوسیله انتشار مربوطه فلوئوروژن هنگامی که در محیط EC-MUG در دمای 44.5 درجه سانتیگراد در مدت 2 ± 24 ساعت یا کمتر رشد می کند،هستند.

این روش به عنوان یک دستور العمل تست تایید کننده استفاده می شود که پس از غنی سازی پیشین در محیط تاییدی برای کل باکتری های گروه کلیفرم را نیز می باشد. این آزمایش به عنوان یک روش چند لوله ای انجام می شود همانطور که در روش 9222 کتاب استاندارد متد تشریح می شود با روش فیلتر غشایی قابل انجام است.

روش فرعی chromogenic substrate (گفته شده در بخش 9223 استاندارد متد ) برای تشخیص مستقیم E. coli نیز می تواند مورد استفاده قرار گیرد. آزمایشات برای E. coli (با استفاده از محیط EC-MUG) برای تجزیه و تحلیل آب آشامیدنی، آۤب های سطحی و آبهای زیر زمین و فاضلاب مورد استفاده قرار می گیرد. E. coli عضوی از مدفوع حیوانات خونگرم است و به وفور در روده و مدفوع این حیوانات یافت می شود. وقوع E. coli به عنوان شاخص مشخصی از مدفوع در نظر گرفته می شود که
آلودگی و احتمال وجود آن پاتوژن های روده ای وجود دارد.

آزمایش تشخیص باکتری اشرشیاکلی در آب

با استفاده از روش EC-MUG برای تایید اشرشیا کلی باید محیط کشت های این روش را تهیه کنیم که بر اساس ترکیبات زیر تهیه می شوند.

برای تهیه محیط کشد اول مواد دی هیدراته را به آب اضافه شود و کاملا مخلوط شود و برای حل شدن حرارت داده شود . pH باید 6.9 ± 0.2 باشند سپس استریل شود.  قبل از استریل کردن، در لوله هایی که تحت نور فلورسنت طول موج (366 نانومتر) نور ماوراء بنفش (UV) قرار نگرفته اند، توزیع شود. لوله معکوس ضروری نیست. فقط لوله ها با کلاهک های پلاستیکی مقاوم در برابر حرارت یا لوله های درب های فلزی بسته شوند.

دستورالعمل آزمایش Ecoli

تمام لوله های تخمیر احتمالی یا بطری های نشان دهنده رشد به همراه گاز یا اسیدیته در طی 3 ± 48 ساعت از رشد آنها در انکوباسیون باید بگذرد. به آرامی لرزش یا چرخش لوله های تخمیر احتمالی یا بطری نشان می دهد رشد، گاز، یا وجود اسیدیته در آنها مشهود است. با استفاده از حلقه فلزی 3- یا 3.5 میلی متری دی متیل استریل یا چوب استرلر چوبی، انتقال رشد از لوله تخلیه پیش فرض یا بطری به محیط کشت EC-MUG ممکن خواهد بود.  لوله های EC-MUG تلقیح شده در حمام آب باید در انکوباتور نگهداری شده در شرایط 44.5 درجه سانتی گراد برای مدت ۲۴ ساعت نگه داری شوند.

تمام لوله های EC-MUG را در حمام آب ظرف 30 دقیقه پس از تلقیح قرار دهید. عمق آب کافی را در انکوباتور آب-حمام نگهداری کنید تا لوله ها در سطح آب داغ باشند. بررسی تمام لوله ها برای رشد فلورسانس با استفاده از a لامپ UV با طول موج طولانی ممکن است. حضور فلورسانس آبی مشخص است و نشانه پاسخ مثبت به E. coli می باشند.

یک کنترل مثبت شامل یک E. coli شناخته شده است (MUG-positive)، یک کنترل منفی شامل کلستیلا پنومونیه ترموتولرانت است.  (MUG-negative)، و کنترل محیطی غیر اختصاصی ممکن است برای تفسیر آن ضروری باشد. نتایج و برای جلوگیری از سردرگمی خودکار فلورسانس ضعیف رسانه به عنوان یک پاسخ مثبت در نظر گرفته می شود.