تعیین کلونی و ثبت نتايج

زمان مورد نیاز برای مطالعه: 4 دقیقه

تعیین کلونی و ثبت نتايج:

بلافاصله پس از پايان مدت گرماگذاري در انکوباتور ، تعیین کلونی را انجام دهيد. چنانچه اين كار امكان پذير نباشد، مي توانيد پليت ها را حداكثر تا 24 ساعت در دماي 10 درجه در يخچال نگه داري كنيد . با كمك يك كلني شمار مدرج با بزرگ نمايي مناسب كه مي تواند از انواع ساده تا دستگاه هاي اتوماتيك با صفحه تلويزيون باشد شمارش را انجام دهيد. بايد توجه داشته باشيد كه به هنگام آماده سازي پليت ها و كشت ميكروبي،حجم نمونه ها را طوري انتخاب كنيد كه براي شمارش نهايي حدود 30 تا 300 كلني در هر پليت تشكيل گردد . هدف اين است كه در حداقل يك پليت حاوي نمونه رقيق شده بتوان تعداد كلني هايي در دامنه فوق را مشاهده و شمارش نمود.

شمارش کلنی

به طور معمول بهتر است بيشتر از 2 میلی لیتر نمونه كشت ندهيد . مگر اينكه كلني ها ي حاصل از  2 میلی لیتر نمونه كمتر از 30 عدد باشد كه در اين صورت بدون توجه به توصيه بالا تمام كلني ها را بشماريد.به جزء موارد استثنايي نظير اين مورد، در ساير مواقع تنها پليت هاي حاوي 300  30 كلني را به حساب آوريد. پس از شمارش كلني ها در هر پليت ، نتيجه را به صورت تعداد باكتريها در میلی لیتر نمونه بيان نماييد. براي محاسبه مي بايست ميانگين تعداد كلني ها در هر پليت را تعيين كرده و با توجه به ضريب رقيق سازي نمونه در آن پليت، نتيجه را بر حسب  CFU /ml گزارش كنيد.

چنانچه در ميان پليت ها ، هيچكدام شمارشي بين 30 تا 300 كلني نداشت و تعدادي از آن ها حاوي بيش از 300 كلني بود از نتيجه تعیین کلونی هائي با نزديكترين عدد به 300 در محاسبات استفاده CFU /ml كنيد. پس از تعين ميانگين شمارش ها در هر پليت نتيجه را با احتساب ضريب رقيق سازي به صورت گزارش نمائيد.

اگر در هيچ يك از پليت ها با ضرايب رقت گوناگون رشد كلني مشاهده نشد نتيجه آزمايش را به  صورت کمتر از 1 كلني در نمونه اي با كمترين ضريب رقت ( با احتساب ضريب رقت ) محاسبه  كنيد .مثلا چنانچه در پليت حاوي نمونه رقيق شده به نسبت 1 به 100 هيچ كلني شمارش نشد ، نتيجه به صورت كمتر از 100 يعني CFU /ml  100  > گزارش مي شود.

در مواردي كه تعیین کلونی در هر پليت بسيار بيشتر از 300 عدد است . نتيجه را به شكل بسيار بيشتر از حد قابل شمار (TNTC) گزارش نكنيد در اين مواقع چنانچه تع داد كلني ها در واحد سطح كمتر از 2 10 بود ، كلني هاي رشد كرده در 13 مربع ( از صفحات مدرج كلني شمار ) كه توزيع  يكنواختي از كلني ها را داشته باشند بشماريد.

بهتر است در صورت امكان 7 مربع متوالي در جهت افقي و 6 مربع متوالي در جهت عمودي را انتخاب كرده و كلني ها را شمارش كنيد. توجه داشته باشيد كه يك مربع را دو بار نشماريد. سپس مجموع كلني هاي شمارش شده در 13 مربع 1 سانتيمتر مربعي را در ع دد 5 cm ) ضرب كنيد تا كل كلني ها در سطح پليت 65 سانتيمتر مربعي 2 5 ) محاسبه شود. اگر تعداد × 13 cm كلني ها در واحد سطح بيشتر از 2 10 بود، فقط 4 مربع انتخابي را شمارش كرده و ميانگين كلني ها / cm ) را در واحد سطح 2براي پليت هاي يكبار × 1 ) محاسبه كنيد.

اين عدد را در ضريب مناسبي ( 57 براي انواع شيشه اي ) ضرب كنيد تا كل كلني ها در سطح پليت به دست آيد . زماني كه × مصرف و 65 cm تعداد كلني ها از 2 100 بيشتر باشد نتيجه را به صورت 6500 < ( براي پليت هاي شيشه اي ) و 5700 / < ( براي پليت هاي پلاستيكي يكبار مصرف ) ضرب در عكس ضريب رقت رقيق ترين نمونه محاسبه و به صورت CFU / ml گزارش كنيد.

اگر حين بررسي پليت ها به كلني هاي اوليه ( گسترش يابنده ) برخورد شد . تنها زماني اين كلني ها شمارش مي شوند كه اولا كلني هاي ثانويه تشكيل شده در سطح عاري از كلني هاي اوليه ، كاملا مشخص و يك نواخت توزيع شده باشند و ثانيا سطح پوشيده شده از كلني هاي گسترش يابنده بيش از نيمي از سطح كل پليت ها را اشغال نكرده با شد.

در صورتي كه كلني هاي گسترش يافته قرار است شمرده شوند ، هريك نوع از انواع زير به عنوان يك واحد كلني در نظر گرفته مي شوند :

  •  زنجيري از تعیین کلونیكه به نظر مي رسد ، در نتيجه تجزيه يكسري توده باكتري به مخلوط كردن آگار و نمونه به وجود آمده باشد .
  •  كلني كه به صورت لايه نازكي بين آگار و كف پليت رشد كرده باشد .
  • كلني كه در لايه نازك آب موجود در لبه آگار و يا آب روي سطح آگار رشد كرده باشند . دو شكل آخر معمولا در اثر تج مع رطوبت در نقطه اي كه كلني گست رش يابنده در آن تشكيل شده ، به وجود مي آيند . اين گونه كلني ها اغلب بيش از نيمي از سطح پليت را پوشانده و كار شمارش قابل اطمينان و صحيح پليت را با مشكل روبرو مي سازد.

براي تعیین کلونی ها ترجيحاً كلني هاي مستقل و مشابه نزديك به هم ولي نه به هم چسبيده، كه فاصله بين آنها حداقل برابر قطر كوچكترين كلني باشد ، را انتخاب كنيد . هر يك از كلني هاي به هم چسبيده اي كه از نظر شكل ظاهري و يا رنگ متفاوت هستند را مستقل به حساب آوريد.

اگر پليت ها داراي كلني هاي اوليه (گسترش يابنده) بيشتري هستند آنها را به صورت ( spr ) گزارش كنيد . چنانچه پليت ها به دلايلي نظر عدم آگاهي از ميزان رقت، ريختن اتفاقي و آلودگي، غير قابل شمارش بوده و يا محيط كشت هاي كنترل ( شاهد ) علايمي از آلو دگي نشان دادند، نتيجه را تحت عنوان حادثه آزمايشگاهي ( LA ) و يا خطاي آزمايشگاهي گزارش نماييد.

 

مقالات پیشنهادی

اجزای میکروسکوپ

اجزای میکروسکوپ میکروسکوپ وسیله ای مناسب برای دیدن موجودات ذره بینی است که دارای انواع و اجزای میکروسکوپ مختلفی می باشد، که هر کدام می توانند کاربرد های متنوعی داشته باشند،مانند میکروسکوپ نوری،زمینه سیاه،فلورسنت،الکترونی و … . میکروسکوپ نوری داری دو سیستم عدسی همگرا شیئی و چشمی است که با هم ، سیستم بزرگ نمایی […]

آزمایش تعیین قلیائیت آب

آزمایش تعیین قلیائیت آب : آزمایش تعیین قلیائیت آب عبارت است از ظرفيت كمي آن براي خنثي سازي يك اسيد قوي تا يـك pHمعـين که برای تعيـين ميزان قليائيت از روش تیتراسیون استفاده می شود. آزمایش تعیین قلیائیت آب شاخص مهم در تعیین میزان خورندگی و رسوبگذاری آب موحود در سیستم های لوله کشی و […]

تجزیه بی هوازی

تجزیه بی هوازی تجزیه بی هوازی شامل جدا کردن باکتری های بی هوازی مولد اسپور  مانند گونه های (clostridium) از نمونه های منبع آنها است. بیشتر باکتری های بی هوازی اجباری مولد اسپور به جنس کلاستریدیوم تعلق دارد بر حسب گونه بوتانل ،اسید بوتیریک، استون،اسیداستیک و ایزوپروپانل ممکن است توسط این باکتری ها تشکیل شود. […]

شبکه توزیع آب شهری

شبکه توزیع آب شهری : شبکه توزیع آب شهری ، آب آشاميدني، آبي است كه براي مصرف انساني و تمامي كاربري هاي خانگي مناسب باشد. دسترسي به آب آشاميدني سالم يك نياز اساسي و يك حقوق انساني است، اما هنوز ريشه ي اصلي بسياري از مسائل بهداشتي بويژه در كشورهاي در حال توسعه، مربوط به […]

مقایسه روش های گندزدایی آب استخر

مقایسه روش های گندزدایی آب استخر مقایسه روش های گندزدایی آب استخر از بين HOCl، ClO2 ، O3 و کلرآمین به صورت زیر در PH برابر 6.8 تا 7 با توجه به حجم آب استخر به صورت زیر پیشنهاد می گردد. اسيد هيپوکلرو در مقایسه با سایر گندزداها از نظر حذف ویروس، کيست آميبها و اسپور باکتری […]

آزمایشگاه آب و پساب

آزمایشگاه آب و پساب

آزمایشگاه آب و پساب برای تشخیص سلامت آب از لحاظ آشامیدنی و آبیاری باید آزمایش میکروبی و شیمیایی آب در آزمایشگاه آب و پساب معتبر اجرا گردد که آزمایشگاه مذکور باید قابلیت اندازه گیری پارامتر هایی همچون تعیین کلیه کاتیون ها و آنیون های آب ، فلزات سنگین و مواد آلی آب را داشته باشد. […]

آزمایش تعیین سختی آب شهر

آزمایش تعیین سختی آب شهر : آزمایش تعیین سختی آب شهر شامل تعیین غلظت يون های كلسيم و منيزيم در آب می باشد که در مورد آب شهر و آب چاه و یا هر نمونه مجهول كه نیاز به آنالیز سختی آن می باشد. به طور کلی آزمایش تعیین سختی آب شهر در دو مرحله […]

آزمایش سديم آب

آزمایش سديم آب : در آزمایش سدیم آب باید بدانیم که سدیم (Na) در گروه یک جدول تناوبی (گروه فلزات قلیایی)، با عدد اتمی 11، جرم مولی g/mol 22/99 و ظرفیت 1 است. از نظر فراوانی، سدیم در حدود 2/5 درصد وزن پوسته زمین را تشکیل می دهد و از 0/02 تا 0/62 درصد وزن […]

کلی فرم های موجود در آب

کلی فرم های آب

کلی فرم های آب کلی فرم ها و باکتری های موجود درآب از علل اصلی آلوده کننده آب های سطحی و زیرزمینی می باشد و ایرن باکتری ها رشد کننده در روده و انسان و حیوان های خون گرم هستند.MPN آب آشامیدنی: آبی است که عوامل فیزیکی، شیمیائی، بیولوژی و راد یونوکلوئیدی آن در حد […]

آزمایش قلیاییت آب

آزمایش قلیاییت آب : برای آزمایش قلیاییت آب آشامیدنی مقداری کربنات و بی کربنات به صورت کربنات سدیم ، بی کربنات سدیم ،و بی کربنات منیزیم وجود دارد. همچنین به ندرت سیلیکاتها و فسفات ها در آب دیده می شوند که در این صورت این یون ها نیز در قلیاییت آب موثر می باشند. منظور […]

نظرات کاربران

ارسال دیدگاه
  • دیدگاه های ارسال شده توسط شما، پس از تایید در وب سایت منتشر خواهد شد.
  • پیام هایی که حاوی تهمت یا افترا باشد منتشر نخواهد شد.
  • مجموع دیدگاهها: 0
  • در انتظار بررسی: 0
  • انتشار یافته: 0

هنوز دیدگاهی ثبت نشده است.

سوالی دارید؟ منتظر تماس شما هستیم

برای دریافت مشاورۀ رایگان، همین حالا با کارشناسان ما تماس بگیرید